Entwicklung einer Methode zur Detektion mehrerer verbotener Hormongruppen in Kälberurin
Hormone sind chemische Botenstoffe im Körper, die insbesondere in den endokrinen Drüsen produziert werden. Diese Botenstoffe steuern die meisten Funktionen des Körpers, ausgehend von den grundlegenden, einfachen Bedürfnissen wie Hunger, bis zu komplexen Vorgängen wie Reproduktion und sogar Emotionen und Stimmung
LC-MS/MS ist eine Kombination von zwei selektiven Techniken. Unter ihrer Verwendung können Analyten auch aus sehr komplexen Proben gemessen werden. Flüssigchromatographie (LC) trennt Verbindungen auf der Grundlage ihrer physikalisch-chemischen Eigenschaften und die Massenspektrometrie (MS) trennt Verbindungen bezogen auf die Molekülmasse.
Zu Beginn wurden die einzelnen Analyten am Massenspektrometer optimiert (getunt) und eine geeignete Methode zur Trennung an der HPLC entwickelt. Im zweiten Schritt galt es, ein geeignetes Extraktionsverfahren zur Isolierung der Analyten aus dem Urin zu entwickeln. Dies erfolgte unter kontinuierlicher Änderung des pH-Wertes nach abgeschlossener Hydrolyse mit ß-Glucuronidase. Die Notwendigkeit der Hydrolyse besteht in dem Umstand, dass ein Großteil der zu bestimmenden Analyten im Urin an Glucuronsäure gebunden sind, zur Messung aber frei vorliegen müssen. In diesem Zusammenhang wurden gezielt auch die Eignung von ß-Glucuronidase aus Helix Pomatia sowie von Glucuronidase aus E. coli getestet. Ziel der Experimente war es, eine möglichst hohe Wiederfindung für die einzelnen Analyten zu erzielen, um die geforderte Empfindlichkeit der Methode zu erreichen. Abschließend erfolgte die Validierung der Methode zur Ermittlung der Nachweis- und Bestimmungsgrenze sowie der Präzision der Methode.
Ziel der Methodenentwicklung war es, ein möglichst effizientes Verfahren für einen hohen Probendurchsatz um eine höchstmöglicher, spezifischer Information zu erhalten. Eine freiwillige Eigenkontrolle der Landwirte im Verband spricht für ein hohes Maß an Eigenverantwortung, Umweltbewusstsein und letztendlich auch für die Qualität der Erzeugnisse.